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NEWS尊龙凯时:分析试剂盒样本测值低的两个关键因素
来源:卞蕊堂 日期:2025-03-18在ELISA实验中,研究人员常常会遭遇样本测值偏低的问题,样本类型涵盖血清、血浆、组织匀浆以及细胞裂解液等。假设实验操作无误且标准曲线表现良好,样本测值低的情况可从以下两个方面进行分析:第一,样本本身的含量可能被检测,但因为实验操作等原因,导致测值未能落在试剂盒的检测范围内;第二,样本中分析物的浓度本身较低。以下将对此进行详细分析并提出相应的解决方案。
(1) **试剂盒的保存**:试剂盒应遵循规定的方法进行保存。研究人员在购买时要特别注意不同组分的保存要求,以确保其性能发挥最佳状态。
(2) **样本上样前的准备**:这一阶段包括样本的制备和保存,以及是否经历过反复冻融。样本制备应根据样本类型采用具体的方法,血清、血浆及细胞裂解液的制备方式各不相同。保存条件包括温度及时间,通常建议在-20℃或-80℃下分装储存,避免长时间存放,以防目标蛋白降解导致检测结果不理想。此外,切忌反复冻融,因其会导致蛋白质降解。
(3) **稀释方案**:样本稀释对实验成功至关重要,过度或不足稀释均可能导致测值低。对于过度稀释,实验者应该根据相关文献及检测范围合理选择稀释倍数。值得注意的是,文献中的样本与实验者自身的样本可能存在差异,建议在正式实验前进行预实验以确定最佳稀释倍数。若出现稀释不足,可能会导致钩状效应的产生,此时相应的解决方案也是在正式实验前进行预实验。
在很多情况下,客户操作无误且标准曲线良好,但样本多次测定仍未落在检测范围。以细胞因子(例如IL-6)为例,其在炎症刺激情况下会大量产生,通常在非炎症样本中检测到的浓度较低。针对这种情况,建议参考文献选择合适的样本类型,同时使用高灵敏度的试剂盒。样本采集的时间点也至关重要,某些生物标志物在体内的含量会因生理周期、疾病进程或治疗反应而波动,采集时间不当可能导致测值偏低。因此,了解和分析目标分析物在体内的变化规律,选择合适的采样时间,是提高样本测值的重要手段。
样本的预处理步骤同样不可忽视。例如,在组织匀浆过程中,使用的缓冲液种类、pH值以及匀浆力度均可能影响分析物的稳定性与释放效率。不恰当的预处理将导致分析物损失,从而降低测值。优化预处理流程,如采用温和的匀浆条件和适宜的缓冲体系,可以有效保留样本中的分析物。
考虑到实验环境的细微差异,如实验室温湿度的控制、实验器具的洁净程度及人员的操作技能等,这些看似微小的因素却能在潜移默化中影响实验结果。保持良好的实验室管理习惯、定期设备校准与维护、以及加强人员培训,都是确保实验准确性的重要基础。
面对样本测值偏低的问题,研究人员应从试剂盒的保存与使用、样本的采集与处理、稀释方案的优化、实验条件的控制等多个方面综合考虑,结合预实验结果灵活调整实验策略,从而获取准确可靠的实验数据。同时,与尊龙凯时试剂盒供应商保持沟通,获取专业技术支持,也是解决实验难题的有效路径。
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